Services analytiques

De l’étude de stabilité des plasmides au séquençage complet, en passant par l’électrophorèse capillaire, le génotypage et les contrôles qualité, nous vous apportons des résultats fiables pour sécuriser vos projets de recherche, développement et production.

Etudes de stabilité des plasmides

L’évaluation précoce de votre plasmide permet d’anticiper les variations susceptibles de compromettre votre projet. Elle inclut l’analyse du comportement de l’ADN plasmidique au cours de la culture bactérienne, notamment la stabilité de la forme supercoiled et de la séquence polyA.

Le succès des thérapies à base d’ARNm dépend fortement de l’intégrité de la cassette d’expression, en particulier de la queue polyA. Pourtant, le maintien d’une séquence polyA stable pendant l’amplification de l’ADN plasmidique constitue un défi bien connu.

Chez RD-BIOTECH, nous proposons des études de stabilité adaptées pour garantir que vos constructions plasmidiques restent intactes à chaque étape de la culture bactérienne.

Pour garantir la qualité de vos matrices, nous combinons des techniques à haute résolution :

  • Restriction enzymatique et électrophorèse sur gel afin de visualiser la taille et l’homogénéité de la queue polyA.
  • Séquençage Sanger pour déterminer la longueur exacte de la queue polyA.

La forme supercoiled (CCC) des plasmides est essentielle à l’efficacité des thérapies géniques, mais également des thérapies à base d’ARNm. Lors de l’amplification bactérienne, les plasmides peuvent subir une multimérisation (formation de dimères, trimères et formes concatémériques), entraînant une perte de superhélicité et une diminution significative des rendements et de la qualité du produit final.

Chez RD-BIOTECH, nous proposons des études de stabilité adaptées pour garantir le maintien de la forme supercoiled et évaluer les risques de multimérisation tout au long du processus de production.

Pour évaluer avec précision la qualité topologique de vos plasmides, nous pouvons réaliser des analyses via :

  • Électrophorèse sur gel d’agarose pour séparer et quantifier les formes supercoiled, open circular, linéaires et multimériques.
  • Electrophorèse capillaire pour une analyse quantitative fine de la proportion de monomère supercoiled

Pourquoi tester la stabilité ?

Une évaluation précoce est le meilleur moyen d’anticiper à chaque étape les variations susceptibles d’impacter la réussite de votre projet

  • Développement du backbone plasmidique : Évaluation de la stabilité de nouvelles constructions de plasmides.
  • Préparation au scale-up : Garantir la qualité lors du passage à la production à grande échelle.
  • Optimisation des procédés : Prédire et minimiser les recombinaisons indésirables selon les souches ou milieux utilisés.

L’avantage RD-Biotech

  • Une expertise solide et ancrée en biologie moléculaire et en analyse de plasmides, avec un focus spécifique sur le comportement de la queue polyA et le taux de surenroulement
  • Des méthodes fiables qui fournissent des résultats reproductibles pour un suivi rigoureux de vos constructions.
  • Des résultats basés sur les données pour améliorer et sécuriser directement vos processus de production.
  • Des services flexibles adaptés aux besoins spécifiques des projets académiques, biotechnologiques et pharmaceutiques.

Séquençage complet des plasmides

Vous disposez d’un plasmide issu d’un autre laboratoire et souhaitez en confirmer la séquence complète afin de l’intégrer à votre base de données et de valider sa fonctionnalité ?

RD-Biotech prend en charge cette analyse pour vous.

Electrophorèse Capillaire CGE

La CGE (Capillary Gel Electrophoresis) est une méthode analytique de précision pour le contrôle qualité des plasmides ADN. Elle offre une haute résolution permettant de distinguer finement les différentes topologies et formes de plasmides.

  • Haute résolution de séparation : La CGE sépare avec précision les isoformes principales des plasmides : formes superenroulées (monomère SC)dimèresformes linéaires (Lin) et formes circulaires ouvertes (OC). Cette résolution supérieure à l’électrophorèse sur gel agarose classique permet une caractérisation topologique détaillée et fiable.
  • Evaluation du taux de linéarisation des plasmides destinés à la production d’ARNm : La CGE permet une quantification précise de l’ADN linéarisé, essentiel à la maîtrise de la qualité en production d’ARNm.
  • Analyse rapide et reproductible : en moins de 2 minutes par échantillon, avec une excellente reproductibilité inter-essais.
  • Quantification précise des monomères, dimères et oligomères : La méthode fournit une quantification quantitative des différentes formes pour évaluer la pureté et l’homogénéité du plasmide.
  • Faible consommation d’échantillon : Seuls quelques microlitres sont nécessaires
  • Méthode adaptée au contrôle qualité et à la R&D : C’est un outil puissant pour les études de stabilité, la validation de procédés de production et le respect des exigences réglementaires. La CGE permet également un screening rapide à grande échelle pour des applications R&D.

Génotypage par PCR

  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Clonage selon la stratégie validée
  • Production plasmidique : de quelques µg d’ADN jusqu’à une production large scale
  • Contrôles qualité :
    • Quantification par spectrophotométrie
    • Contrôle du profil de restriction par électrophorèse en gel d’agarose
    • Séquençage (insert complet)
  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Clonage selon la stratégie validée
  • Production plasmidique : de quelques µg d’ADN jusqu’à une production large scale
  • Contrôles qualité :
    • Quantification par spectrophotométrie
    • Contrôle du profil de restriction par électrophorèse en gel d’agarose
    • Séquençage (insert complet)

Nous mettons à votre disposition une expertise en génotypage par PCR pour la détection de séquences ADN spécifiques au sein de vos échantillons biologiques. Basée sur l’amplification ciblée de régions génomiques d’intérêt, cette approche permet une identification précise et fiable de marqueurs génétiques, mutations, insertions, délétions ou contrôle de transgènes.

Ce service inclut l’extraction de l’ADNg cible à partir de votre matrice (sang, tissu, bactérie, cellule, plante…), le design de primers adaptés, la réalisation de la PCR et son contrôle par électrophorèse et/ou séquençage.

Contrôles Qualité

Dans le cadre de ses activités de production plasmidique, RD-Biotech propose une gamme complète d’analyses de contrôle qualité, que ce soit pour ses propres productions ou pour celles de ses clients.

Nos prestations couvrent différents niveaux de caractérisation et de conformité, afin de répondre aux exigences spécifiques de chaque projet, de la recherche à la production de grade réglementaire.

De nombreuses analyses sont réalisées selon les méthodes et référentiels de la Pharmacopée Européenne (Eur. Pharm.), garantissant des résultats fiables et conformes aux standards de qualité en vigueur.

Paramètres

Méthodes

Apparence
Concentration en plasmides
Pureté basée sur le rapport A260/A280
Identité du plasmide
Séquence du plasmide
Intégrité de la queue poly(A)
Conformation du plasmide
Efficacité de linéarisation (sur de l'ADN plasmidique linéaire)
Protéines totales résiduelles
ARN résiduel
ADN génomique bactérien résiduel
Activité RNase
Activité DNase
Endotoxine
Mycoplasme
Essai de stérilité
Charge microbienne
pH
Osmolalité
Inspection visuelle

Texte de description au survol.

Spectrophotométrie UV
Spectrophotométrie UV
Digestion enzymatique et électrophorèse sur gel d'agarose
Séquençage Sanger ou ONT
Digestion par enzymes de restriction et électrophorèse sur gel d'acrylamide
Chromatographie d'interaction hydrophobe ou CGE
Densitométrie sur électrophorèse sur gel d'agarose ou CGE
Dosage des protéines μBCA
Électrophorèse sur gel d'agarose (avec coloration au SYBR Gold)
qPCR ou contrôle visuel après électrophorèse sur gel d'agarose
Méthode fluorométrique
Méthode fluorométrique
Test LAL quantitatif
qPCR
Inoculation directe
Détermination quantitative des micro-organismes (TAMC, TanMC, TYMC) par filtration sur membrane
Potentiométrie
Mesure physique

Découvrez nos autres services en biologie moléculaire

Privacy Preference Center

Besoin d'un devis
ou de renseignements ?
CLIQUEZ ICI