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Services analytiques

De l’étude de stabilité des plasmides au séquençage complet, en passant par l’électrophorèse capillaire, le génotypage et les contrôles qualité, nous vous apportons des résultats fiables pour sécuriser vos projets de recherche, développement et production.

Etudes de stabilité des plasmides

L’évaluation précoce de votre plasmide permet d’anticiper les variations susceptibles de compromettre votre projet. Elle inclut l’analyse du comportement de l’ADN plasmidique au cours de la culture bactérienne, notamment la stabilité de la forme supercoiled et de la séquence polyA.

Le succès des thérapies à base d’ARNm dépend fortement de l’intégrité de la cassette d’expression, en particulier de la queue polyA. Pourtant, le maintien d’une séquence polyA stable pendant l’amplification de l’ADN plasmidique constitue un défi bien connu.

Chez RD-BIOTECH, nous proposons des études de stabilité adaptées pour garantir que vos constructions plasmidiques restent intactes à chaque étape de la culture bactérienne.

Pour garantir la qualité de vos matrices, nous combinons des techniques à haute résolution :

  • Restriction enzymatique et électrophorèse sur gel afin de visualiser la taille et l’homogénéité de la queue polyA.
  • Séquençage Sanger pour déterminer la longueur exacte de la queue polyA.

La forme supercoiled (CCC) des plasmides est essentielle à l’efficacité des thérapies géniques, mais également des thérapies à base d’ARNm. Lors de l’amplification bactérienne, les plasmides peuvent subir une multimérisation (formation de dimères, trimères et formes concatémériques), entraînant une perte de superhélicité et une diminution significative des rendements et de la qualité du produit final.

Chez RD-BIOTECH, nous proposons des études de stabilité adaptées pour garantir le maintien de la forme supercoiled et évaluer les risques de multimérisation tout au long du processus de production.

Pour évaluer avec précision la qualité topologique de vos plasmides, nous utilisons pouvons réaliser des analyses via :

  • Électrophorèse sur gel d’agarose pour séparer et quantifier les formes supercoiled, open circular, linéaires et multimériques.
  • Electrophorèse capillaire pour une analyse quantitative fine de la proportion de monomère supercoiled

Pourquoi tester la stabilité ?

Une évaluation précoce est le meilleur moyen d’anticiper à chaque étape les variations susceptibles d’impacter la réussite de votre projet

Pourquoi tester la stabilité ?

Une évaluation précoce est le meilleur moyen d’anticiper à chaque étape les variations susceptibles d’impacter la réussite de votre projet

  • Développement du backbone plasmidique : Évaluation de la stabilité de nouvelles constructions de plasmides.
  • Préparation au scale-up : Garantir la qualité lors du passage à la production à grande échelle.
  • Optimisation des procédés : Prédire et minimiser les recombinaisons indésirables selon les souches ou milieux utilisés.

L’avantage RD-Biotech

  • Une expertise solide et ancrée en biologie moléculaire et en analyse de plasmides, avec un focus spécifique sur le comportement de la queue polyA et le taux de surenroulement
  • Des méthodes fiables qui fournissent des résultats reproductibles pour un suivi rigoureux de vos constructions.
  • Des résultats basés sur les données pour améliorer et sécuriser directement vos processus de production.
  • Des services flexibles adaptés aux besoins spécifiques des projets académiques, biotechnologiques et pharmaceutiques.

Séquençage complet des plasmides

Vous disposez d’un plasmide issu d’un autre laboratoire et souhaitez en confirmer la séquence complète afin de l’intégrer à votre base de données et de valider sa fonctionnalité ?

RD-Biotech prend en charge cette analyse pour vous.

Electrophorèse Capillaire CGE

  • Haute résolution de séparation
  • Analyse rapide et reproductible
  • Quantification des monomères, dimères et oligomères
  • Faible consommation d’échantillon
  • Méthode adaptée au contrôle qualité et à la R&D

Génotypage

Génotypage par PCR : détection et validation de séquences spécifiques par amplification ciblée de l’ADN, au sein de vos échantillons biologiques. 

  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Préparation du matériel génétique (extraction et purification d’ADNg ou d’ARNm)
  • Mise au point des conditions opératoires ou application de procédures validées par vos soins
  • Fourniture d’un rapport d’analyse clair et détaillé
  • Clonage selon la stratégie validée
  • Production plasmidique : de quelques µg d’ADN jusqu’à une production large scale
  • Contrôles qualité :
    • Quantification par spectrophotométrie
    • Contrôle du profil de restriction par électrophorèse en gel d’agarose
    • Séquençage (insert complet)

Contrôles Qualité

Service de QC des productions d’ADN plasmidique : test LAL, détection HCP, RNA, ADNg, pH, absence de mycoplasmes…

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