Construction de Plasmides

Chaque année, RD-Biotech conçoit et produit plus de 1 000 plasmides pour plus de 500 clients — chercheurs académiques, équipes R&D industrielles ou biotechs en développement clinique.

Vecteurs d’expression, plasmides rapporteurs, constructions multi-cistroniques, outils CRISPR : la diversité des demandes reflète celle des thématiques abordées, de la biologie cellulaire fondamentale jusqu’aux applications en thérapie génique.

C’est pourquoi notre approche commence toujours par une écoute : comprendre votre contexte, votre niveau d’avancement, vos objectifs. Que vous disposiez d’un design abouti ou que vous cherchiez encore la meilleure stratégie, nos experts s’adaptent et vous proposent la solution la plus pertinente.

Au-delà de la construction du vecteur, RD-Biotech peut prolonger l’accompagnement jusqu’à l’expression de la protéine recombinante — pour ceux qui souhaitent externaliser l’ensemble du workflow ou bénéficier d’une validation fonctionnelle en interne.

Plasmides sur mesure

La construction de Plasmides commence rarement au même endroit selon les projets. C’est pourquoi nous avons conçu une approche sans prérequis : vous nous apportez ce dont vous disposez, nous prenons en charge le reste.

Le matériel de départ peut prendre de nombreuses formes : une séquence nucléique codante ou régulatrice, une séquence protéique, un identifiant GenBank ou UniProt, ou simplement une référence bibliographique. Dans ce dernier cas, nos experts identifient et récupèrent la séquence d’intérêt à votre place.

Côté vecteur, plusieurs options s’offrent à vous : nous sélectionnons dans notre collection interne le backbone le mieux adapté à votre système d’expression, ou nous travaillons avec votre propre vecteur accepteur, dans le respect d’une confidentialité stricte. Vous pouvez également nous soumettre une séquence plasmidique que vous ne détenez pas physiquement : nous nous chargeons de la reconstruction.

La diversité des constructions que nous réalisons ( inserts de grande taille, séquences à fort contenu GC, éléments répétés, fragments toxiques ) témoigne de notre maîtrise d’un large panel de stratégies de clonage, mobilisées et adaptées selon les spécificités de chaque projet

Ce que vous nous apportez

Séquence nucléique ou protéique

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Votre propre vecteur

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Construction complexe

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Identifiant GenBank / Uniprot

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Une idée, une discussion

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Mutagenèse sur plasmide existant

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Références bibliographiques

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Clonage simple ou multicassette

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Remplacement d'éléments (iTRs...)

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Construction de plasmides sur mesure

Design & Strétégie >

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Clonage & construction >

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Contrôle qualité >

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Livraison & rapport

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Applications & finalités

Librairie génique

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Vecteurs viraux (AAV, lentivirus)

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Développement de lignées cellulaires

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CRISPR / Cas9

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Contrôles PCR rapporteurs

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Expression de protéines recombinantes

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Outils de recherche

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shNRA / miRNA

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ARNm / Transcription IVT

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Livrables

Tous les vecteurs que nous clônons bénéficient d’une garantie de fidélité de 100%. Vous trouverez ci-dessous les points de contrôle qualité appliqués au clonage de vecteur sur mesure

Spectrophotométrie avec mesure de la densité optique (DO) à 260/280 nm

  • N.A

Electrophorèse sur gel agarose

  • Profil non digéré
  • Profil de digestion enzymatique

Electrophorèse sur gel acrylamide

  • Profil  de digestion du polyA (Si applicable)
  • Autres contrôles disponibles sur demande
  • Séquençage de l’insert par Sanger
  • Séquençage complet du plasmide par Oxford nanopore sequencing
  • Séquençage complet du plasmide par Sanger (sur demande)

Procédé de clonage de vecteurs

Notre équipe de spécialistes en biologie moléculaire peut définir avec vous la meilleure stratégie de clonage en fonction de votre cahier des charges :

  • Etude in silico
  • Choix et design de la séquence nucléique d’intérêt
  • Optimisation ou non de la séquence
  • Méthode d’obtention de la séquence (PCR, synthèse de gène)
  • Choix du vecteur de clonage (ajout d’étiquette, séquences de promoteur, insertion de séquences de clivage particulières, co-expression ou non …)
  • Choix de la technologie de clonage
  • Clonage selon la stratégie validée
  • Production plasmidique : de quelques µg d’ADN jusqu’à une production large scale
  • Contrôles qualité :
    • Quantification par spectrophotométrie
    • Contrôle du profil de restriction par électrophorèse en gel d’agarose
    • Séquençage (insert complet)

Plasmides pour la production d’anticorps et protéines recombinantes

La performance d’une protéine recombinante ou d’un anticorps dépend de la qualité du vecteur d’expression utilisé. RD-Biotech vous accompagne dès les premières étapes du projet en concevant des plasmides adaptés aux contraintes biologiques, aux objectifs d’expression et aux applications finales.

Que vous travailliez sur des anticorps de tous formats ou sur des protéines recombinantes complexes, nous optimisons chaque élément du plasmide (séquence, promoteurs, tags, signaux de sécrétion…) pour maximiser le rendement, la solubilité et la fonctionnalité de votre produit.

Anticorps

Tous formats · Toutes espèces · Tous isotypes

Ce que vous apportez

Protéines recombinantes

Toutes natures · Tous systèmes d’expression

Ce que vous apportez

Données de départ

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Publication / référence bibliographique

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Séquences VH/VL nucléiques ou protéiques

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Hybridome → séquençage mAb en interne

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Données de départ

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Publication / référence bibliographique

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Identifiant UniProt / GenBank

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Une idée, un objectif fonctionnel

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RD-Biotech construit

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Chimérisation toutes espèces

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Reformatage du format anticorps

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Séquençage mAb à partir d'hybridome

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Design et optimisation du vecteur

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RD-Biotech construit

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Optimisation de codons selon le système hôte

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Choix et design des tags (His, GST, FLAG…)

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Sélection du vecteur d'expression adapté

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Choix du système d'expression

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Formats livrés

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IgG full length, Fab, Fab'2, scFv

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Bispécifique, VHH

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Tous isotypes, Toutes espèces

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Types de protéines

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Protéines membranaires, Enzymes, Cytokines

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Facteurs de croissance

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Protéines de fusion, Rapporteurs, Protéines structurales

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Deux modes opératoires selon vos contraintes

RD-Biotech s’adapte à vos exigences en termes de propriété intellectuelle. Pour les projets orientés performance, nous utilisons une technologie sous licence garantissant des rendements supérieurs à 0,8 mg/L en expression transitoire d’anticorps (le matériel plasmidique restant propriété de RD-Biotech).

Pour les projets nécessitant un transfert de technologie, nous travaillons avec des vecteurs libres de droits, mis intégralement à disposition du client à l’issue du projet.

Plasmides pour la production d’ARNm par transcription in vitro

La qualité d’un ARNm produit par transcription in vitro dépend avant tout de la qualité de son plasmide matrice. Promoteur de transcription, régions 5′ et 3′ non traduites (UTRs), cadre de lecture ouvert (ORF), queue polyA et site de linéarisation, chacun de ces éléments influence directement le rendement de transcription, la stabilité de l’ARNm et son efficacité de traduction.

RD-Biotech intervient à chaque niveau de cette conception. Nous pouvons modifier un plasmide existant :

  • Changement d’ORF, optimisation des UTRs, ajustement de la taille de la queue polyA, repositionnement du site de linéarisation
  • ou construire une nouvelle matrice à partir de vecteurs libres de droits, dans lesquels nous intégrons des UTRs libres de droits associées à l’ORF de votre choix.

La linéarisation du plasmide peut également être prise en charge en interne, ainsi que la production de petits lots d’ARNm par IVT pour la validation de vos POC.

Plasmides pour la production de vecteurs viraux et thérapie génique

La production de vecteurs viraux repose sur un système multi-plasmides dont la qualité et la conception conditionnent directement l’efficacité du vecteur final. RD-Biotech maîtrise la construction de l’ensemble de ces composants — plasmides helper, de packaging et de transfert — pour les principaux systèmes utilisés en thérapie génique : AAV et lentivirus en priorité, d’autres systèmes étant accessibles sur demande.

Le plasmide de transfert constitue le cœur de notre intervention en biologie moléculaire. C’est lui qui porte le transgène d’intérêt et les éléments régulateurs associés — promoteur, ITRs, séquences d’encapsidation, éléments insulateurs. Sa conception est entièrement personnalisable selon votre cible thérapeutique, votre sérotype AAV, votre tropisme cellulaire ou vos contraintes de capacité d’insert.

Le temps est un enjeu majeur dans votre projet ? Vous devez obtenir vos lots pilotes dans des délais plus courts ?

Nous mettons à votre disposition une offre de production Fast-Track, vous permettant de recevoir vos productions d’anticorps en seulement quatre semaines.

Nous proposons la production d’anticorps recombinants à partir d’une lignée cellulaire stable ou d’un pool de cellules stable, fournis par le donneur d’ordre ou développés par RD-Biotech.

Cette approche, largement utilisée en biotechnologie, permet d’obtenir des anticorps en grande quantité (plusieurs grammes) tout en garantissant une expression constante et reproductible.

Plasmides pour le développement de lignées cellulaires

Service de développement de plasmides pour la génération de vos lignées cellulaires.

Nous vous accompagnons dans le choix des éléments clés (promoteurs, cassettes d’expression, marqueurs de sélection) pour garantir stabilité, expression efficace et performance durable de vos cellules.

reformating-anticorps

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Séquençage des anticorps issus d’hybridomes

Service d’expression d’anticorps recombinants par transfection transitoire Prestations prises en charge par RD-BIOTECH
Le client fournit Séquençage Séquences nucléiques VH VL Synthèse clonage Vecteurs d’expression Transfection transitoire Livrables
Anticorps monoclaux Anticorps recombinants purifiés et contrôlés (pureté >98% et qualité endfree
Séquences VH VL
Vecteurs d’expression
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